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不想挑晶体?原位晶体筛选,测试和结构解析方法

浏览次数:80发布日期:2020-08-04

  X射线晶体衍射仪经历了快速发展的10年,我们的光源越来越强,探测器越来越快,数据处理越来越智能。仪器的进步,大大提高了我们的晶体数据收集的效率和成功率,让我们有更多的时间研究更深入的问题。然而好的晶体永远都是一位的尤其对于蛋白质晶体来说,获得能够衍射的晶体,仍然是主要的瓶颈之一。通常,为了检验蛋白质晶体的衍射质量,我们需要从晶体板上挑出晶体,加上防冻剂,冷冻,放到衍射仪上,然后测试。然而所有这些步骤都有可能损坏晶体。低温晶体筛选不仅耗时耗力,而且我们没有办法避免这些操作过程对晶体衍射质量的影响。

 

  几年前,在同步辐射出现了原位晶体学的方法:快速,方便,可以直接在晶体生长环境下研究晶体的衍射。原位的方法避免了低温晶体学在晶体转移过程中对晶体的损害。同样在室内衍射仪上,Bruker D8 VENTURE-ISX STAGE同样完美地实现了原位晶体筛选评估:

 

  1.切换方便,5分钟内即可完成样品台的安装和拆卸

  2.软件控制,只需要鼠标点击即可快速对整个晶体板的每个结晶空进行查看

  3.自动多样品队列衍射实验

  4.快速表征晶胞参数,识别晶体以及后续的数据收集

 

 ▲ ISX Stage mounted on D8 VENTURE

 

实验案例:GlucoseIsomerases晶体筛选和测试

 

仪器配置:D8VENTURE IµS 3.0,PHOTONII,ISX STAGE

样品:GlucoseIsomerases结晶初筛48孔板,96个drop

总时间:1h(查看96个drop:30min;衍射28个晶体:30min;晶胞表征:10min)

 

1

晶体查看,挑选

 

 

 ▲ ISX Stage Software Control

 

2

确定晶体筛选队列

 

 ▲ 挑选用于自动筛选的晶体

 

3

自动队列晶体衍射实验

 

 

 ▲ 30min,6个孔,28个晶体样品筛选结果

 

4

数据收集

 

室温下,原位对4颗晶体进行数据收集,然后合并数据,使用MR解析结构。

 

 

 ▲ 原位常温数据采集和结构解析

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